① 怎麼樣實驗室提取葉綠素具體流程步驟
葉綠素提取的准備工作是在一個半暗的房間里,室溫保持在25℃。提取步驟如下:
(1) 取1000克新鮮的綠葉,在韋氏攪切器中粉碎。
(2)將粉碎的1000克綠葉放進加有少量的碳酸鈣的丙酮中(溫度20℃)進行萃取,直到過濾、清洗後的葉子碎片為無色。
(3)將過濾後的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中,然後輕輕地旋轉,同時加放蒸餾水直到分層為止。水層的大部分丙酮和水溶雜質被丟棄,只剩石油醚溶液。
(4)將石油醚溶液用蒸餾水再次凈化後,用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上,最後得到黃綠色懸浮液。
(5)用無水硫酸鈉對懸浮液進行乾燥,並將其滲入到3cm厚的蔗糖粉末製成柱中,然後用石油醚清洗沉澱的色素去掉類胡蘿卜素,使之只含有天然的葉綠素。
(6)含有天然葉綠素的蔗糖柱分兩層,綠層有4-10mm的葉綠素b層,另一藍層為2-6mm的葉綠素a層。
(7)將位於藍層正中的部分(約占藍層的一半) 放入醚中,對此懸浮液進行過濾、洗提,用蒸餾水清洗,用硫酸鈉乾燥,再用器皿進行過濾後,得到葉綠素a。
(8)將(6)中的綠層中間部分移出,迅速放入醚中過濾、洗提,製成葉綠素b醚溶液
② 超聲提取的葉片,用甲醇溶解的,怎麼才能出去葉綠素
可參考次維特色譜分析法:使用一根充滿CaCO3的玻璃柱管來分離植物葉的石油醚提取液。操作時將提取液從柱頂端倒入,提取液中的色素被吸附在頂端,然後用純凈的石油醚沖洗,可以觀察到柱管從上到下形成綠、黃、黃三條色帶,再用石油醚繼續沖洗就可分別收集各色帶的洗脫液。經鑒定其分別為葉綠素、葉黃素和胡蘿卜素。現在市售的色譜儀有很多種,必有一種適合樓主的。
③ 葉綠素的提取和分離
一 實驗目的
1.掌握提取葉綠素的方法;
2.了解薄層層析的原理,掌握薄層層析的一般操作和定性鑒定方法
二 實驗原理
1.葉綠素提取
高等植物體內的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類,主要包括葉綠素a (C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H70O6N4Mg)、β—胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)等4種。葉綠素a和葉綠素b為吡咯衍生物與金屬鎂的配合物,胡蘿卜素是一種橙色天然色素,屬於四萜類,為一長鏈共軛多烯,有α、β、γ三種異構體,其中,β異構體含量最多。葉黃素為一種黃色色素,與葉綠素同存在於植物體中,是胡蘿卜素的羥基衍生物,較易溶於乙醇,在乙醚中溶解度較小。根據它們的化學特性,可將它們從植物葉片中提取出來,並通過萃取、沉澱和色譜方法將它們分離開來。
2.薄層色譜
薄層層析是快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術,具有設備簡單、操作方便而快速的特點。它是將固定相支持物均勻地鋪在玻片上製成薄層板,將樣品溶液點加在起點處,置於層析容器中用合適的溶劑展開而達到分離的目的。用此法分離時幾乎不受溫度的影響,可採用腐蝕性顯色劑,而且可在高溫下顯色,特別適用於揮發性小或在較高溫度下易發生反應的物質,同時也常用來跟蹤有機反應或監測有機反應完成的程度。
薄層層析的器材選擇:
(1)基板:玻璃、塑料、金屬箔,常用玻璃板。
(2)吸附劑:
吸附劑要有合適的吸附力,並且必須與展開劑和被吸附物質均不起化學反應。可用作吸附劑的物質很多,常用的有硅膠和氧化鋁,由於吸附性好,適用於各類化合物的分離,應用最廣。選擇吸附劑時主要根據樣品的溶解度、酸鹼性及極性。氧化鋁一般是微鹼性吸附劑,適用於鹼性物質及中性物質的分離;而硅膠是微酸性吸附劑,適用於酸性物質及中性物質的分離。以下簡單介紹吸附劑的幾個基本參數。
種類:常用:氧化鋁(強極性)、硅膠(中強極性)
不常用:硅藻土、纖維素、糖類、活性碳
符號:H——無任何添加劑;G——加有鍛石膏(Gypsum,CaSO4·1/2 H2O)粘合劑;
F——加有熒光素(Fluorescein)
CMC——加有羧甲基纖維素鈉(Carboxymethyl cellulose)
例:硅膠GF254表示硅膠中既加有煅石膏粘合劑,也加有熒光素,可以在波長254nm的紫外光下激發出熒光
粒度:目:1cm2內的篩孔數,數目越大,顆粒越小。薄層所用吸附劑顆粒較細,氧化鋁為200目,硅膠為100~150目。
μ:顆粒的平均直徑,以微米表示。例如:40μ的顆粒與100目相當。
活性:
吸附劑按其含水量的多少各分為五個等級:I級含水量最少,活性最高;V級含水量最多,活性最低;但並不是活性越高分離效果越好,選用哪種活性級別的吸附劑,要用實驗的方法來確定。
酸鹼性:
市售氧化鋁有酸性(用以分離酸性化合物)、中性、鹼性(用以分離生物鹼等鹼性化合物),其蒸餾水洗出液的pH值分別為4、7.5、9—10;其中以中性氧化鋁應用最廣,可用來分離各種化合物,特別是那些對酸、鹼敏感的化合物。
硅膠沒有酸鹼性之分。
(3)展開劑
在樣品組分-吸附劑-展開劑三個因素中。對一確定組分,樣品的結構和性質可看作是一不變因素,吸附劑和展開劑是可變因素。而吸附劑的種類有限,因此選擇合適的展開劑就成為解決問題的關鍵。展開劑的選擇有以下要求:
(a)對待測組分有很好的溶解度。
(b)能使待測組分與雜質分開,與基線分離。
(c)使展開後的組分斑點圓而集中,不應有拖尾現象。
(d)使待測組分的Rf值最好在0.4~0.5,如樣品中待測組分較多,Rf值則可在0.25~0.75范圈內,組分間的Rf值最好相差0.1左右。由於薄層色譜法用途非常廣泛,國內外均有現成的鋪有吸附劑的薄層板出售。一般實驗室中也可自己制備。
(e)不與組分發生化學反應,或在某些吸附劑存在下發生聚合。
(f)具有適中的沸點和較低的粘滯度。
展開劑的極性是指與樣品組分相互作用時。展開劑分子與吸附劑分子的色散作用、偶極作用、氫鍵作用及介電作用的總和。展開劑要根據樣品的極性及溶解度,吸附劑活性等因素進行選擇,總的原則是展開劑的極性能使組分的Rf值在0.5左右。常用溶劑極性次序是:石油醚<環己烷<苯<乙醚<氯仿<乙酸丁酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇。
如一種溶劑不能充分展開,可選用二元或多元溶劑系統。
4.展開槽與展開:
薄層的展開在密閉的容器即展開槽或稱為層析缸中進行。
展開:
合適的展開劑用量為浸及下端硅膠,但不浸及樣點;點樣端向下,每次只展開一塊,放在正中,以免爬斜(進而展開傾斜)。
5.顯色:
如果化合物本身有顏色,就可直接觀察它的斑點。如果本身無色,可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點(有苯環的物質都有),用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置;對於在紫外燈光下不顯色的,可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點(因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點),顯色後,立即用鉛筆標出斑點的位置。常用
普適性顯色劑:濃硫酸、碘蒸氣、熒光素,專用顯色劑:茚三酮、三氯化鐵溶液等。
三、實驗儀器與葯品
儀器:半微量玻璃儀器一箱,小燒杯,層析缸(槽),載玻片(100mm×25mm)乾燥器,電吹風,毛細管,移液管,研缽,布氏漏斗,抽濾裝置。
試劑:硅膠,1% CMC,石油醚(60~90℃),乙醇,丙酮,乙醚,飽和NaCl溶液,無水Na2SO4
四、實驗步驟
1.制板:
將硅膠加 1% CMC,調成槳狀(硅膠:CMC=1:3~4)(在平鋪玻璃板上能晃動但不能流動),將其塗在載玻片上(100mm×25mm)),為使其坦平,可將載玻片用手端平晃動,至平坦為止,放在干凈平坦的檯面上,晾乾之後放入105℃烘箱活化1小時,取出放入乾燥器內待用。
2、葉綠素的提取
在研缽中放入幾片(約5g)菠菜葉(新鮮的或冷凍的都可以.如果是冷凍的,解凍後包在紙中輕壓吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液,適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中,加人10 mL飽和NaCl溶液(防止生成乳濁液)除去水溶性物質,分去H2O層,再用蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入乾燥的小錐形瓶中,加2g入無水Na2SO4乾燥。乾燥後的液體傾至另—錐形瓶中(如溶液顏色太淺,可在通風櫃中適當蒸發濃縮)。
3、點樣
用一根內徑 1mm的毛細管,吸取適量提取液,輕輕地點在距薄板一端1.5cm處,平行點兩點,兩點相距1cm左右。若一次點樣不夠,可待樣品溶劑揮發後.再在原處點第二次,但點樣斑點直徑不得越過2mm。
4、展開
先在層析缸中放入展開劑[石油醚(60~90℃)-丙酮—乙醚(體積比為3:1:1)],加蓋使缸內蒸氣飽10min, 再將薄層板斜靠於層析缸內壁。點樣端接觸展開劑但樣點不能浸沒於展開劑中,密閉層祈缸。待展開劑上升到距薄層板另一端約1crm時,取出平放,用鉛筆或小針劃前沿線位置,晾乾或用電吹風吹乾薄層。
五、實驗注意事項
1.制板時用注意使板上硅膠厚度盡量一致。
2.植物葉片不要研成糊狀,否則會給分離造成困難
④ 求葉綠素的提取具體操作步驟
提取:(1) 取菠菜或其他植物新鮮葉片4-5片(2g左右),洗凈,擦乾,去掉中脈剪碎,放入研。(2) 研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉,加2-3ml 95%乙醇,研磨至糊狀,再加10-15ml 95%乙醇,離心35min,提取上清液過濾於三角瓶中,殘渣用10ml 95%乙醇沖洗,一同過濾於三角瓶中。(3) 如無新鮮葉片,也可用事先制好的葉乾粉提取。取新鮮葉片(以菠菜葉最好),先用105℃殺青,再在80℃下烘乾,研成粉末,密閉儲存。用時稱葉粉2g放入小燒杯中,加95%乙醇20-30ml 浸提,並隨時攪動。待乙醇呈深綠色時,濾出浸提液備用。分離:(1) 取圓形定性濾紙一張(直徑11cm),將其剪成濾紙條(9cm×3cm),用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液,沿紙條的長度方向塗在紙條的一邊(距邊約1cm),使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內,風干後,再重復操作數次。(2) 在層析缸中加入適量的推動劑,將濾紙條帶有色素的一端插入層析缸中,使濾紙條下端浸入推動劑中。迅速蓋好層析缸蓋。此時,推動劑借毛細管引力順濾紙條向上擴散,並把葉綠體色素向上推動,不久即可看到各種色素的條帶。(3) 當推動劑前沿接近濾紙邊緣時,取出濾紙,風干,即可看到分離的各種色素:葉綠素a為藍綠色,葉綠素b為黃綠色,葉黃素為鮮黃色,胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。
⑤ 提取葉綠素用的溶劑是什麼用於色素分離的溶劑是什麼分離過程中,擴散速度最快的色素是什麼
你好!
提取葉綠素用的溶劑:丙酮或無水乙醇,由於丙酮揮發性比較強,現在一般用無水乙醇。用於色素分離的溶劑:層析液(由20份在60-90攝氏度下分餾出來的石油醚、2份丙酮和1份苯混合而成。93號汽油也可代用)。分離過程中,擴散速度最快的色素:胡蘿卜素,它在層析液中溶解度最大,隨層析液擴散的速度最快。
如有疑問,請追問。
⑥ 提取與分離葉綠體色素的原理分別是什麼
提取葉綠體色素的原理是葉綠素是葉綠酸的酯,在鹼的作用下,可使其酯鍵發生皂化作用,生成葉綠酸的鹽,能溶於水。
分離葉綠體色素的原理是類胡蘿卜素中,胡蘿卜素是不飽和的碳氫化合物,β—胡蘿卜素水解可生成2分子維生素A,葉黃素是由胡蘿卜素衍生的二元醇,不能與鹼發生皂化反應,根據這一點,可以將葉綠素和類胡蘿卜素分開。
(6)怎麼分離石油葉綠素擴展閱讀:
紙層析法一般用於葉綠體中色素的分離,葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b,將葉片碾碎,浸出綠色液體,將液體與層析液(石油醚)混合,將濾紙一段進入混合液體。
四種色素它們在層析液中的溶解度不同,溶解度大的隨層析液在濾紙上擴散地快,反之則慢。最後在濾紙上留下4條色素帶,由此觀查出各種色素的相對含量和種類。所以利用紙層析法能將葉綠體中的色素分離。
參考資料來源:網路——葉綠體色素
⑦ 葉綠素的提取和分離實驗中,畫濾液細線用的液體是什麼
畫濾液細線用的液體:丙酮(作用:溶解葉綠體中的色素)
葉綠體中的色素都能夠溶解於有機溶劑丙酮中,所以,可以用丙酮提取葉綠體中的色素。
層析液(石油醚):是一種脂溶性很強的有機溶劑。(作用:溶解並分離色素)
根據葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度不同來進行分離,溶解度高的在濾紙上擴散的快,溶解度低的擴散得慢。溶解度最高的是胡蘿卜素,它隨石油醚在濾紙上擴散得最快,葉黃素和葉綠素a的溶解度次之;葉綠素b的溶解度最低,擴散得最慢。這樣,四種色素就在擴散過程中分離開來。
附:實驗教學方案—葉綠體中色素的提取和分離
實驗原理
葉綠體中的色素都能夠溶解於有機溶劑丙酮中,所以,可以用丙酮提取葉綠體中的色素。
層析液(石油醚)是一種脂溶性很強的有機溶劑。根據葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度不同來進行分離,溶解度高的在濾紙上擴散的快,溶解度低的擴散得慢。溶解度最高的是胡蘿卜素,它隨石油醚在濾紙上擴散得最快,葉黃素和葉綠素a的溶解度次之;葉綠素b的溶解度最低,擴散得最慢。這樣,四種色素就在擴散過程中分離開來。
目的要求
1.學會提取和分離葉綠體中色素的方法和原理。 2.能分辨葉綠體中的四種色素。 材料用具
新鮮的綠色葉片(如菠菜葉片)。
乾燥的定性濾紙,燒杯( 100 mL),研缽,玻璃漏斗,吸管,剪刀,小試管,葯勺,量筒(10ml),天平,試管架 丙酮,層析液,二氧化硅,碳酸鈣。
方法步驟
1.提取綠色葉片中的色素
(1)取幾片綠色的葉片,去掉葉柄和主脈,用天平稱取5g葉片,剪碎,放入研缽中。
(2)向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣,進行充分的研磨。用量筒量取5ml丙酮,倒入研缽中,迅速充分研磨。 (3)將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進行過濾。將濾液收集到一個小試管中,及時用棉塞將試管目塞緊。
2.制備濾紙條
取一塊預先乾燥處理過的定性濾紙,將濾紙剪成長 10 cm、寬 1cm的濾紙條,在距濾紙條一端 1cm處用鉛筆畫一條細的橫線。
3.畫濾液細線、
用毛細吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線均勻地畫出一條細而直的濾液細線。待濾液於後,再畫2~3次。
4.分離葉綠體中的色素
將3 mL層析液倒入燒杯中,將濾紙條(有濾液細線的一端朝下)略微料靠著燒杯的內壁,輕輕地插入到層析液中,隨後用培養皿蓋蓋上燒體;注意,不能讓濾紙上的濾液細線觸到層析液。 5.觀察實驗結果
看到四種色素的顏色後,取出濾紙條,觀察濾紙條上的色素帶顏色、位置、寬窄,並且填寫實驗報告。
⑧ 為什麼用乙醇提取葉綠素,用丙酮分離葉綠素
葉綠素是脂溶性色素,一般只要是有機溶劑都可以提取。但根據葉綠素的極性,最好的還是丙酮,其次是氯仿,正己烷,甲醇和乙醇。丙酮是常用的溶劑中對葉綠素溶解度最大的溶劑,最小的則是乙醇。丙酮在常溫下通過振盪就可以完全提取葉綠素,而乙醇的話你就必須要加熱,或者是加入四分之一體積的醋酸才能達到這個效果。就提取效果來說,丙酮要好很多。再者,溶解的越多,現象就越清晰。在紙層析的時候,葉綠素a和葉綠素b帶的就越明顯。